社区应用 最新帖子 精华区 社区服务 会员列表 统计排行 搜索 博客
主题 : 论坛精彩论文选刊(十七)
悬壶澳洲 离线
级别: 总版主
显示用户信息 
0  发表于: 2015-08-13  

论坛精彩论文选刊(十七)






电针不同穴位对功能性腹泻大鼠血清和组织中GASSS的影响
王渊1,刘智斌2,牛文民2,杨晓航2
(1.陕西中医药大学,陕西 咸阳 712046)
[摘要]目的:观察不同穴位处方电针对功能性腹泻大鼠血清和组织中GAS、SS含量的影响,探讨电针治疗功能性腹泻的机理。方法:将SD大鼠50只随机分为5组,即正常组、模型组、电针Ⅰ组(取双侧天枢、大肠俞)、电针Ⅱ组(取双侧曲池、上巨虚)、电针Ⅲ组(取单侧天枢、大肠俞、曲池、上巨虚),模型对照组以番泻叶灌胃建立大鼠模型,电针各组分别按穴位给予电针治疗,每组连续治疗10天后检测血清和组织中GAS、SS的变化。结果:电针Ⅰ组血清和组织中GAS含量明显降低,SS含量明显升高,与模型组比较有极显著性差异(P<0.01)。结论:电针可能是通过降低功能性腹泻大鼠血清和组织中GAS含量和提高SS含量而改善功能性腹泻;电针Ⅰ组作用好于其他两组,说明取天枢、大肠俞治疗功能性腹泻效果更好。 
[关键词]功能性腹泻;电针;穴位处方;脑肠肽;动物实验
Influence on GAS、SS in the Blood Serum and Tissue by Electroacupunture at Different Acupoints in Rats of Fuctional Diarrhea
WANG Yuan1, LIU Zhibin2, NIU Wenmin2,YANG Xiaohang2
(Shannxi University of Chinese Medicine,Xianyang 712046,Shannxi,China)
【Abstract】Objective:To observe the influence on GASSS in the blood serum and tissue by electroacupunture at different acupoints in rats of fuctional diarrhea,to investigate the therapeutic mechanism of electroacupuncture on fuctional diarrhea.Methods:Fifty SD rats were randomly divided into five groups:control group,model group,electroacupuncture group Ⅰ(Tianshu(ST 25),Dachangshu(BL 25)of both sides),electroacupuncture group Ⅱ(Quchi(LI 11),Shangjuxu(ST 37)of both sides),electroacupuncture group Ⅲ(Tianshu(ST 25),Dachangshu(BL 25), Quchi(LI 11), Shangjuxu(ST 37)of single side).The model of functional diarrhea rats were established by intragastric administration of senna leaf.Each electroacupuncture group were treated electroacupuncture at different acupoints.Braingut petide such as GAS,SS in the  blood serum and tissue of rats in each group were determined after 10 days continuously treatment.Results: After electroacupuncture treatment,the content of GAS decreased obviously and SS increased obviously of electroacupuncture group  in contrast with model group(P<0.01).Conclusion:The mechanism of electroacupuncture treatment of fuctional diarrhea may be due to the decrease of braingut petide such as GAS and increase of braingut petide such as SS in the blood serum and tissue of fuctional diarrhea rats. Electroacupuncture group is better than electroacupuncture groupand Ⅲ,it may be suggest that Tianshu(ST 25),Dachangshu(BL 25)is better than other acupoints in treating fuctional Diarrhea.
Key Words:functional diarrhea;electroacupuncture ;acupoint group;braingut petide;animal experiment
功能性腹泻(FD)是功能性腹泻是指有腹泻症状, 但系统检查未能发现有胃肠器质性病变, 是一种最常见的胃肠道功能紊乱性疾病的一种腹泻。病因尚未阐明, 可能与遗传、环境及心理和精神因素有关[1]。电针作为治疗功能性腹泻的方法之一, 疗效确切, 作用稳定而持久, 在临床已得到证实。但针灸取穴的方法繁多复杂, 治疗功能性腹泻的特异性穴位处方的研究鲜见报道。在功能性腹泻机理的研究中, 有学者发现血清中胃泌素(GAS)和生长抑素(SS)均参与了肠运动的调节[2,3]。为了探讨电针治疗功能性肠病的特异性穴位处方及其机理, 本研究以番泻叶灌胃处理大鼠作为功能性腹泻模型, 根据神经节段分布选取3组穴位处方, 观察了不同穴位处方电针对功能性腹泻大鼠血清及组织GAS、SS的影响。
1.材料与方法
1.1实验动物 SPF级3.5月龄的SD大鼠50只, 由西安交通大学实验动物中心提供(动物合格证号:SCXK(陕)2012.008),平均体质量(200±10)g,雌雄各半。
1.2试剂及主要仪器大鼠 GAS、SS酶联免疫吸附(ELISA)试剂盒(美国Novateinbio公司);2010型anthos酶标仪;全自动酶标洗板机(奥地利安图斯);电子称;离心机;灌胃器。
1.3分组 将实验动物随机分为5组,每组10只。正常组(Control,n=10):以22~26℃0.9%NaCI溶液3ml/只灌胃后,不做任何处理。模型组( Model,n=10):功能性腹泻造模。EA I组 (单元取穴组,n=10): 造模+电针双侧天枢和双侧大肠俞;EA Ⅱ组 (集元取穴组,n=10):造模+电针双侧曲池和双侧上巨虚。EA Ⅲ组(单元加集元取穴组,n=10):造模+电针单侧天枢、单侧大肠俞、单侧曲池、单侧上巨虚。
1.4功能性腹泻造模 将SD大鼠单只单笼关起,笼下垫滤纸,正常饲养一周后,每日采用25℃番泻叶煎剂给予3ml/只进行灌胃。每天1次,连续造模14天。为消除生物节律的影响,每天同一时间进行束缚应激。停止灌胃后各组继续正常饲食、饮水,观察14d,至第28d造模结束。
1.5取穴方法 参照大鼠常用针灸取穴法, 上巨虚位于大鼠后肢足三里向下约5mm处,曲池在大鼠桡骨近端的关节外侧前方的凹陷中,大肠俞位于第4腰椎棘突下,旁开5mm,天枢穴位于脐中旁开5mm。
1.6 针刺方法及时间 将大鼠固定在木板上, 常规消毒后, 毫针刺入各组相应穴位, 针刺深度5mm, 针后加用韩式电针仪(LH202H型),选择疏密波,频率为疏波2Hz,密波15Hz,电流强度为1.5mA,以引起大鼠肢体轻微抖动为度,留针20分钟,每日1次, 10次为一疗程,一个疗程后评定疗效。
1.7指标及检测方法  血清及组织中GAS、SS的检测:10%水合氯醛300 mg/kg腹腔注射麻醉,腹主动脉取血将从腹主动脉取出的血注入含7.5%乙二胺四乙二钠(EDTA-Na2)和抑肽酶的试管中静止30 min,3000r/min离心10 min,分离血清。取血后,取胃窦、十二指肠、结肠、下丘脑等组织,备检组织称重后于2 ml 100℃生理盐水中煮沸3 min 后冷却,加入1 mol/L 冰醋酸0.5ml 于匀浆器中制成匀浆,再用1 mol/L 碳酸氢钠0.5 ml 中和,使pH 值为7.40,总体积为3 ml,4℃条件下离心,3500 r/min,30 min,分离上清液1ml,然后利用全自动酶标仪,在450 nm处测定各孔的OD值,采用Curve-Expert 1.3进行标准曲线的绘制,并计算出对应的浓度值。
1.8统计方法 计数资料用X2检验,计量资料,两样本均数±标准差表示, 用t检验,采用SPSS17.0 软件包进行统计分析。
2.实验结果
2.1血清及组织中GAS含量的变化

表1电针各治疗组对大鼠血清中GAS含量的影响(
±S)
组别                  n                     GAS(pg·ml-1)

control                10                     48.32±9.15
model                 10                     89.24±29.11△△
EAⅠ                 10                     67.13±20.61△△**
EAⅡ                 10                     81.72±23.92△△*
EAⅢ                 10                     79.15±21.55△△*

注: 与正常组比较, △P <0.05, △△P < 0.01;电针各组与模型组比较,*P < 0.05,**P < 0.01。
由表1可见,模型组与正常组比较,大鼠血液中GAS 含量明显升高,有极显著性差异(P<0.01); 电针治疗三组与模型对照组比较, 可使血液中GAS含量均降低, 有显著性差异(P<0.05或P<0.01); 仅单元取穴组可使血液中GAS含量明显降低, 与模型组比较, 有显著性差异(P<0.05); 集元取穴组和单元加集元取穴组比较, 血液中GAS 含量的变化, 无显著性差异(P>0.05)。结果表明, 番泻叶灌胃可使大鼠血液中的GAS 含量升高。电针治疗三组可使大鼠血液中GAS 含量有所降低, 但不能恢复正常水平, 其中集元取穴组和单元加集元取穴组的作用相当,单元取穴组可使大鼠组织中GAS含量下降并接近正常水平。

表2电针各治疗组对大鼠组织中GAS(pg/ml)含量的影响(
±S)
组别  n       胃窦    十二指肠      结肠          下丘脑

Control  10    25.41±8.24    27.21±8.78       30.16±9.12       40.73±10.85
model    10    50.32±16.32△△ 63.11±18.23△△    57.24±17.12△△    61.42±19.01△△
EA I     10    27.01±9.61** 30.14±10.42**  31.63±10.22** 41.71±18.42**
EAⅡ     10    35.51±12.55△ 45.51±13.66△△**   35.11±12.42** 39.56±19.56**
EAⅢ     10    40.23±14.33△  32.44±12.31**   36.12±11.56** 43.41±11.52**

注: 与正常组比较, △P <0.05, △△P < 0.01;电针各组与模型组比较,*P < 0.05,**P < 0.01
由表2可见,模型组大鼠胃窦、十二指肠、结肠、下丘脑组织中的GAS含量明显高于同期正常组(P<0.01);电针治疗后,随着腹泻症状的改善,胃窦、十二指肠、结肠、下丘脑组织中的GAS含量下降,治疗后与模型组比较有显著性差异(P < 0.05);其中,单元取穴组可使胃窦、十二指肠、结肠、下丘脑中GAS的含量明显降低,与模型对照组比较,有极显著性差异(P<0.01)。结果表明, 番泻叶灌胃可使大鼠组织中的GAS含量升高。电针治疗三组可使大鼠血液中GAS含量有所降低, 但不能恢复正常水平,单元取穴组可使大鼠胃窦、十二指肠、结肠、下丘脑等组织中GAS含量降低并接近正常水平。
2.2血清及组织中SS含量的变化

表3电针各治疗组对大鼠血清中SS含量的影响(
±S)
组别               n                     SS(pg·ml-1)

control              10                   150.41±29.85
model               10                     50.13±7.52△△
EAⅠ                10                   109.72±12.13△△**
EAⅡ                10                     74.56±9.93△△*
EAⅢ                10                     72.11±9.21△△*

注: 与正常组比较, △P <0.05, △△P < 0.01;电针各组与模型组比较,*P < 0.05,**P < 0.01。
由表3可见,模型组与正常组比较,大鼠血液中SS含量明显降低,有极显著性差异(P<0.01);电针治疗三组与模型对照组比较, 可使血液中SS含量均升高, 有显著性差异(P<0.05或P<0.01); 仅单元取穴组可使血液中SS含量明显升高, 与模型对照组比较, 有极显著性差异(P<0.01); 集元取穴组对血液中SS含量的影响,与单元加集元取穴组比较,无显著性差异(P>0.05)。结果表明, 番泻叶灌胃可使大鼠血液中的SS含量降低。集元取穴组和单元加集元取穴组可使大鼠血液中SS含量有所升高, 但不能恢复正常水平,单元取穴组可使大鼠组织中SS含量升高并接近正常水平。

表4电针各治疗组对大鼠组织中SS(pg/ml)含量的影响(
±S)
组别  n       胃窦        十二指肠         结肠          下丘脑

Control  10      57.54±10.01       18.84±4.65         26.24±5.01       8.12±1.61
model    10      30.53±6.63△△      9.84±0.86△△        11.42±0.98△△     2.34±0.14△△
EA I     10      55.24±9.51** 19.43±4.97 ** 27.44±5.43**  7.25±1.03**
EAⅡ     10      50.51±8.42** 17.33±4.01** 20.13±5.83**     5.02±0.89**
EAⅢ     10      47.23±7.33△**      17.44±4.42** 22.01±4.91**      4.23±0.76△

注: 与正常组比较, △P <0.05, △△P < 0.01;电针各组与模型组比较,*P < 0.05,**P < 0.01
由表4可见,模型组大鼠胃窦、十二指肠、结肠、下丘脑组织中的SS含量明显低于同期正常组(P<0.01);电针治疗后,随着腹泻症状的改善,各组织中的SS含量升高,治疗后与模型组比较有显著性差异(P < 0.05)。其中,单元取穴组可使胃窦、十二指肠、结肠、下丘脑中SS的含量明显升高,与模型对照组比较,有极显著性差异(P<0.01)。结果表明, 番泻叶灌胃可使大鼠组织中的SS含量降低。电针治疗三组可使大鼠血液中SS含量有所升高, 但不能恢复正常水平,单元取穴组可使大鼠胃窦、十二指肠、结肠、下丘脑等组织中SS含量降低并接近正常水平。
3.讨论
从“内经”时代及至后世医家,古典医籍中应用针灸较多依据经脉一脏腑相关理论从与脾胃经相关的合穴、俞穴和募穴等角度来调节腹泻,我们选择的曲池是大肠经的合穴,上巨虚是大肠经的下合穴,天枢是大肠经募穴,大肠俞是大肠之背俞穴。合穴是特定穴之一,对治疗六腑病起重要作用,《灵枢·邪气脏腑病形》载:“合治内府”。 “募穴”是脏腑之气聚于胸腹部的腧穴,“背俞穴”是脏腑之气聚于胸背部的腧穴,脏腑之气与俞募穴有共同之处,故选用取合穴和下合穴以及俞募配穴,治疗腹泻是针灸临床常用的经典方法。
脑肠肽是在中枢神经系统和胃肠道双重分布的调节肽。在生理情况下,它通过中枢神经系统及胃肠平滑肌细胞调节胃肠的运动。根据其对胃肠平滑肌细胞的直接收缩或舒张效应不同,可分为兴奋性脑肠肽和抑制性脑肠肽两类。前者常见的有胃泌素、P物质等,这些肽作用于胃肠平滑肌细胞可使其收缩;后者以血管活性肠肽、生长抑素等多见,它们能使胃肠平滑肌细胞产生舒张效应[4]。因此,血清及组织中脑肠肽含量的异常与胃肠动力障碍的发生密切相关。这些小分子多肽与靶细胞上的受体结合后,通过不同的信号途径发挥不同的生物学效应, 对消化系统的运动、分泌、吸收、免疫和增生等具有重要的调节作用; 同样, 与腹泻的发生也密切有关。
胃泌素(GAS)是一种重要的胃肠激素,胃泌素几乎对整个胃肠道均有作用,它可促进胃肠道的分泌功能[5];促进胃窦,胃体收缩,增加胃肠道的运动,同时促进幽门括约肌舒张,故其净作用是促进胃排空;也可直接使人胃体、胃窦环形肌肌条收缩,并经胆碱能神经途径来完成对胃窦纵行肌肌条收缩。胃泌素能增强结肠平滑肌的收缩, 并可能是进食影响结肠运动的重要因素,故血清GAS水平在一定程度上可以反映胃肠道的运动功能状态。
生长抑素(SS)对消化系统的生物学作用主要是抑制, 其可抑制胃、肠、胆囊的蠕动, 减少胃肠道壁血流量, 抑制胃酸、胃蛋白酶、肝胆汁、小肠液的分泌, 抑制胃泌素等各种胃肠激素的分泌。在调节胃肠蠕动方面,通过D 细胞旁分泌效应直接抑制大多数肌间丛神经元的冲动发放, 在神经和神经元连接处释放引起肠运动抑制;通过神经内分泌作用直接抑制胃肠道的运动 [6]。
从上述实验结果中可以看出,番泻叶灌胃可以使兴奋性脑肠肽GAS在大鼠血清及组织中的含量升高, 又可使抑制性脑肠肽SS在血清及组织中的含量降低, 从而导致了大鼠的胃肠胃动力受到兴奋,出现腹泻。说明番泻叶灌胃可以通过影响大鼠血清及组织中的脑肠肽含量来抑制胃肠的运动功能, 证明用番泻叶灌胃复制功能性腹泻大鼠是可行的。
在电针治疗三组穴位中,电针单元取穴组可以降低功能性腹泻大鼠血清及组织中的GAS的含量, 同时又可以升高血清及组织中SS的含量, 从而减弱了功能性腹泻大鼠的胃蠕动功能。此外,针灸对脏腑病变具有恢复稳态平衡的调节效应,腧穴与相同节段神经支配的内脏器官在交感神经控制下组成一个相对紧密联系的结构-功能性单元;围绕这种结构-功能性单元的异神经节段神经支配区域经穴形成一个可能通过副交感神经通路发挥相悖效应的功能性集元。单元经穴和集元经穴共同构建躯体传入信息调整和平衡内脏功能的稳态系统。副交感神经活动偏亢的病症主要取单元穴位。功能性腹泻是一种肠道传输功能亢进所出现的病变过程,是由于副交感神经兴奋亢进,导致肠道传输功能过强引起,所以相应的功能性单元穴位可兴奋节段性的交感神经,抑制副交感神经,具有降低肠传输的功能,达到治疗功能性腹泻的作用。
本研究结果证明电针双侧天枢、大肠俞对于功能性腹泻有明显的调节作用,且效果优于电针双侧曲池、上巨虚和电针单侧曲池、上巨虚、天枢、大肠俞,表明电针治疗功能性腹泻,应当从同神经节段支配区域经穴考虑,才能更好地维护躯体传入信息调整和平衡内脏功能的稳态系统的平衡和稳态,从而对功能性腹泻大鼠的肠运动起到最佳的调节作用,这也为针灸治疗功能性腹泻的临床选穴提供了实验证据。
参考文献
[1] 刘劲松,候晓华.慢性腹泻与功能性肠病[J]. 中国实用内科杂志,2003, 23(10) : 578-580.
[2] Perston DM, Adrian TE, Christofides ND,etal.Positive correlation betw een symptoms circulating motilin, pancreatic polypeptide and gastrin concentrations in functional boweldisorders[J].Gut, 1995,26:1059-1064.
[3]Oomura Y, Mizuno Y. Effect of somatostatin on the vagal motor neuron in the rat. Brain Res Bull, 1986,17:397
[4] 谢胜,税典奎.旋覆代赭汤对胃动力低下大鼠血清及组织中GAS、SP及SS含量的影响[J].中医药学报,2010,38(5):65-68.
[5] Ekunday A A,Lee C Y and Goodlad R A.Gastrin and Growth of the gastrointestinal tract[J].Gut,1995,36:203-208.
[6]李君,艾瑛,喻国华等.和胃调中汤对大鼠胃动力及胃肠激素的影响[J].时珍国医药.2009,20(9):[url=tel:2323-2324]2323-2324[/url].
基金项目:国家重点基础研究发展计划(973计划)资助项目:2011CB505204
作者简介:王渊(1980-),男,副主任医师,讲师,博士,研究方向:针灸推拿治疗脊柱疾病和老年病的基础与临床研究,电话:[url=tel:13571062833]13571062833[/url],e-mail:icharles117@1[size=1.5em]26.com


快速回复 顶端
内容
HTML 代码不可用
 使用签名
 Wind Code自动转换
 匿名帖
 隐藏此帖
 隐藏附件
 出售
 加密
限 500 字节
认证码:
验证问题:7+7/7+7*7-7=? 正确答案:50
限 500000 字节
按 Ctrl+Enter 直接提交